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Analyse rapide et directe d’acides aminés non-dérivés dans les préparations pour nourrissons

Application phare : Analyse d’Acides Aminés non-dérivés sur Raptor Polar X

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  • Préparation d’échantillon simple, en une étape, pour l’analyse directe d’acides aminés non-dérivés.
  • Analyse simultanée d’acides aminés polaires, non polaires, chargés positivement et chargés négativement, sur un cycle d’analyse court de 10 minutes.
  • Le gradient spécifiquement développé permet de séparer les contaminants des analytes d’intérêt.

Pour garantir la satisfaction des besoins nutritionnels, on a besoin de méthodes analytiques fiables pour une détermination précise des acides aminés libres dans les préparations pour nourrissons. La dérivation pré-colonne, suivie d’une d’analyse LC en phase inverse, est une approche typique, cette dérivation étant nécessaire en raison d’une faible rétention chromatographique et d’une mauvaise sensibilité pour les acides aminés libres. Mais ces méthodes sont souvent chronophages et assez laborieuses. L’utilisation d’acides perfluorés comme réactifs d’appariement d’ions, afin d’améliorer la rétention des acides aminés non-dérivés sur une colonne C18, est une autre technique courante, mais ce genre d’analyses peut avoir un impact négatif sur le système chromatographique et le spectromètre de masse.

L’approche présentée ici est plus simple, car les acides aminés non-dérivés peuvent être analysés directement en LC-MS/MS – suivant une préparation d’échantillons simple en une seule étape – en utilisant une colonne Raptor Polar X. Les colonnes Raptor Polar X sont faites d’une phase hybride (HILIC et Échange Ionique) utilisant différents mécanismes d’interactions qui fournissent la rétention et la résolution nécessaires à l’analyse simultanée d’une grande variété de composés aux chimies et structures différentes. Comme démontré ici, des acides aminés non-dérivés aux chaînes latérales polaires, non polaires, chargées positivement et chargées négativement, ont été correctement retenus et séparés avec
un gradient court de 10 minutes. Ce dernier a également permis de séparer les contaminants du système des analytes d’intérêt, augmentant la robustesse de la méthode. En suivant cette méthode, les procédures de préparation d’échantillons chronophages et laborieuses, qui peuvent inclure de coûteux kits de dérivation, sont remplacées par une simple précipitation de protéines puis une analyse directe de l’extrait. L’analyse directe d’acides aminés non-dérivés sur une colonne Raptor Polar X fournit d’excellents résultats, tout en restant simple et rapide, ce qui en fait une alternative très avantageuse aux méthodes traditionnelles.

cgarm-img
LC_FF0579
PeakstR (min)Precursor IonProduct Ion
1.Tryptophan1.17205.07146.08
2.Phenylalanine1.26166.13120.10
3.Leucine1.41132.1386.10
4.Isoleucine1.55132.1386.10
5.Methionine1.62150.07104.10
6.Tyrosine1.69182.10136.08
7.Taurine1.91126.07108.07
8.Valine1.98118.1372.11
9.Proline2.29116.1370.09
10.Alanine3.0090.0344.10
PeakstR (min)Precursor IonProduct Ion
11.Threonine3.12120.1374.08
12.Glycine3.6276.1030.11
13.Glutamine3.87147.1384.07
14.Serine3.93106.0760.09
15.Asparagine4.08133.1374.07
16.Arginine4.47175.1770.09
17.Histidine4.66156.07110.16
18.Lysine4.97147.1384.13
19.Glutamic acid5.89148.1084.10
20.Cystine6.10241.13152.00
21.Aspartic acid7.12134.0774.06
ColumnRaptor Polar X (cat.# 9311A12)
Dimensions:100 mm x 2.1 mm ID
Particle Size:2.7 µm
Temp.:30 °C
Standard/Sample
Diluent:20:80 Water:acetonitrile, 0.01 N HCl
Conc.: Endogenous amino acids
Inj. Vol.:5 µL
Mobile Phase
A:Water, 0.5% formic acid
B:Mobile Phase B: 9:1 Acetonitrile:20 mM ammonium formate in water (pH 3.0) (The ammonium formate concentration is 20 mM relative to the total volume of mobile phase B. See preparation notes for instructions on diluting a 200 mM aqueous starting solution.)
Time (min)Flow (mL/min)%A%B
0.000.51288
3.500.51288
8.000.57030
8.010.51288
10.00.51288
DetectorMS/MS
Ion Mode:ESI+
Mode:MRM
InstrumentUHPLC
Sample PreparationA 200 µL aliquot of protein hydrolysate formula (Similac ALIMENTUM) was mixed with 800 µL of acetonitrile and 10 µL of 1 N HCl. After centrifugation at 4000 rpm for 5 minutes, the supernatant was diluted 20-fold with 20:80 water:acetonitrile (0.01 N HCl) and injected for analysis.
NotesMobile Phase B Preparation: To make 500 mL of mobile phase B, measure ~45 mL of water into a small beaker and add 1 mL of 10 M ammonium formate solution. Adjust pH to 3.0 by adding formic acid and then bring the volume to 50 mL with water. Combine this 50 mL ammonium formate solution (pH 3.0) with 450 mL of acetonitrile to complete the preparation.
FFFA3436A-FR