Comment mettre en route une nouvelle colonne LC

 

Transcription

Félicitations pour votre nouvelle colonne !

Vous êtes prêts pour obtenir des résultats chromatographiques de haute qualité. Mais avant de pouvoir utiliser votre colonne pour vos analyses, il y a quelques étapes à suivre afin de la préparer à sa nouvelle vie dans votre laboratoire.

Dans ce Conseil Restek, nous allons vous guider dans la mise en route de votre nouvelle colonne LC.

Nous commencerons par vous montrer où trouver le certificat d’analyse et détaillerons les informations qu’il contient. Nous parlerons des différents raccords que vous pouvez utiliser et de la manière de monter la colonne sur votre chaîne. Ensuite, nous verrons comment conditionner votre colonne avec votre phase mobile, et enfin, nous discuterons de la sélection du débit adéquat pour votre colonne.

Allons-y.

Certificat d’Analyse

Toutes les colonnes fabriquées par Restek sont testées de manière individuelle pour assurer de hautes performances. Un certificat d’analyse est généré pour chaque colonne et contient le rapport d’analyse avec les conditions utilisées. Il répertorie aussi le solvant de stockage de la colonne, auquel nous ferons référence plus tard. Vous pouvez télécharger votre certificat d’analyse depuis le site internet Restek à tout moment, depuis l’adresse restek.com/documentation, ce qui peut être utile si un problème analytique est rencontré.

Connecter votre colonne

Regardons de plus près votre nouvelle colonne. Toutes les colonnes LC de Restek sont fabriquées en acier inoxydable 316, ce qui signifie qu’elles sont résistantes à la corrosion. Si une colonne Restek est déjà montée sur votre système, votre nouvelle colonne sera pour sûr compatible avec les raccords que vous utilisez. Cependant, si une colonne d’un autre fabriquant est montée sur votre système, vous pourriez avoir besoin de nouveaux raccords. Si vos raccords sont sertis de façon permanente, coupez la tubulure en amont du raccord ou remplacez l’ensemble tubulure + raccord. Bien que vous ayez des raccords en PEEK ou en acier inoxydable déjà installées sur votre système, il est tout de même important de vérifier si ceux-ci conviennent pour votre analyse. Les raccords en PEEK sont parfaits pour les applications à basse pression — en-dessous de 4000 psi ou 275 bars — mais sont susceptibles de fuir à des pressions plus élevées. Si vous utilisez des débits moyens à élevés, une colonne avec des particules plus petites, ou une colonne avec un faible diamètre interne, il y a de fortes chances que votre pression dépasse 4000 psi. Nous déconseillons donc leur utilisation dans de telles conditions. Les raccords en acier inoxydable sont d’excellents choix pour les applications à très haute pression. Cependant, l’un des principaux inconvénients des raccords en acier inoxydable est qu’ils nécessitent des clés pour les installer sur la colonne, et la profondeur de la tubulure ne peut être réglée qu’une seule fois car les ferrules “pincent” la tubulure. Les raccords EXP sont une autre option permettant de connecter votre colonne à votre instrument. Les raccords EXP sont fabriqués à base de titane / PEEK, ce qui permet des serrages manuels efficaces jusqu’à 8700 psi ou 600 bars — et même au-delà de 20000 psi ou 1380 bars avec un petit tour de clé supplémentaire. Leur profondeur est réglable, ce qui vous permet de connecter des colonnes présentant différentes profondeurs d’assise, et ce à plusieurs reprises, sans avoir à changer les raccords ou la tubulure. Les raccords EXP proposent toutes les capacités liées à l’analyse haute-pression inhérentes aux raccords en acier inoxydable tout en offrant nombre des avantages des raccords en PEEK ce qui en fait un choix facile et incontournable. Le montage de votre colonne est relativement simple, mais il y a quelques considérations à garder à l’esprit. Assurez-vous que vos connecteurs sont correctement installés dans la colonne avant de les serrer. Des connexions mal serrées peuvent introduire un volume mort, entraînant un élargissement de la bande chromatographique et une perte d’efficacité. Cela peut également rendre plus difficile le démontage de la colonne à l'avenir. Enfin, vérifiez que le sens indiqué par la flèche sur l’étiquette de votre colonne corresponde au sens de passage de votre phase mobile. Ne pas le faire peut diminuer la durée de vie de votre colonne et résulter en une perte d’efficacité.

Conditionnement

Maintenant que votre colonne est installée, il est temps de vérifier si la phase mobile que vous utilisez est compatible avec le solvant de stockage présent dans la colonne. Chaque colonne est expédiée dans un solvant de stockage qui garde la colonne stable pour un stockage à long terme. Le solvant de stockage est indiqué sur votre certificat d’analyse. Si le solvant que vous souhaitez utiliser n’est pas miscible avec le solvant de stockage — ici un tableau disponible sur restek.com pour plus d’informations — alors vous devrez conditionner la colonne avec un solvant intermédiaire qui est compatible avec le solvant de stockage ET votre phase mobile. Si vous souhaitez utiliser un tampon, assurez-vous qu’il ne précipite pas dans votre phase mobile ou dans le solvant de stockage. La plupart des solvants de stockage contiennent plus de 50% de solvant organique, ce qui peut faire précipiter les tampons et boucher la colonne. Cela risque également d’augmenter la contre-pression, donc assurez-vous d’avoir assez de phase mobile aqueuse pour garantir que votre tampon reste en solution.

Débit

La prochaine étape est la sélection d’un débit approprié aux caractéristiques de votre colonne. Le débit optimal de travail est déterminé par le diamètre interne de la colonne et la taille des particules de la phase stationnaire, comme le montre ce tableau. Lors du lancement du débit à travers la colonne, nous recommandons de diriger de débit dans un bécher pendant 10 à 15 minutes. Commencez par un débit faible puis augmentez-le graduellement jusqu’au débit optimal durant ces 10-15 minutes. Des changements brusques de pression peuvent provoquer des fuites voire même endommager le lit de particules de la colonne, causant de mauvaises formes de pics ou des pics dédoublés. Une fois que la colonne a été correctement conditionnée au débit souhaité, arrêtez le débit de phase mobile. Vous pouvez maintenant connecter votre colonne à votre détecteur.

Et c’est parti !

Voilà comment préparer votre nouvelle colonne LC !

Pour toute question, contactez-nous via restek.com.

Merci d’avoir suivi ce Conseil Restek !