Conditionnement d'une colonne HPLC

Description

(sous-titres disponibles en français)

Une ligne de base propre et stable est essentielle pour une bonne analyse en chromatographie liquide, et conditionner correctement votre colonne LC est important pour vous en assurer. Vous devrez "éliminer" le solvant de stockage puis équilibrer la colonne avec votre mélange de solvants. Vous devrez peut-être également utiliser un solvant intermédiaire pour vous assurer d’un rinçage complets et optimaux. 

Ressources complémentaires

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Produits Restek associés

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Transcription

Bonjour à toutes et à tous. Merci de nous rejoindre pour ce conseil Restek.

Aujourd’hui, nous allons parler du conditionnement d’une colonne HPLC. La plupart du temps, la colonne que vous recevez n’est pas immédiatement prête à l’emploi, à moins que la phase mobile que vous allez utiliser ne soit strictement identique au solvant de stockage de la colonne. La nature du solvant de stockage est spécifiée sur le certificat d’analyse, que vous pourrez consulter ou télécharger à partir du lien internet fourni à l'intérieur de la boîte de la colonne. La plupart de nos colonnes sont stockées dans des mélanges de solvants contenant au moins 50% de solvant organique. Si vous utilisez une phase mobile différente du solvant de stockage, il convient d’abord de “rincer“ la colonne avec une phase mobile à la composition en solvant organique 10% ou 20% plus faible. Faites passer un volume équivalent à 10 volumes de colonne avant de basculer ensuite sur la phase mobile que vous allez utiliser dans votre méthode. Pour calculer le volume de la colonne, vous pouvez utiliser l’une de ces 2 formules. Notez que la valeur de la constante est différente selon que vous utilisez une particule de silice complétement poreuse ou superficiellement poreuse.

Si vous utilisez des tampons dans votre méthode, vous devrez d’abord “rincer“ la colonne avec une phase mobile à la composition en solvant organique 10 à 20% plus faible que celle du solvant de stockage, ceci afin de vous assurer qu’il n’y ait pas de précipitation des sels lorsque vous introduirez le tampon, car cela pourrait conduire à une augmentation de la contre-pression et au final boucher la colonne. Après avoir fait passer vos 10 volumes de colonne, basculez sur la phase mobile tamponnée que vous allez utiliser, et “rincer“ à nouveau la colonne avec 10 volumes de colonne.

Surveillez la ligne de base et attendez qu’elle se stabilise en termes de pression car cela vous indiquera que la colonne est équilibrée. De nombreux utilisateurs aiment faire une ou deux injections de conditionnement avant de commencer leurs analyses. C’est un bon moyen pour préparer la colonne à être utilisée dans les conditions prévues pour votre méthode. Une fois ces injections de conditionnement effectuées, la colonne est alors prête pour votre série d’analyses.

J’espère que ces informations sur l’équilibration d’une colonne étaient claires.

A bientôt pour de nouveaux conseils Restek.